分析蛋白质特性和测定溶液中蛋白质纯度最常用的方法之一是观察样品对紫外光波长的吸收。含有适当氨基酸的蛋白质可吸收紫外光谱上的光,特别是峰值波长为260 - 280纳米(nm)的光。这使得分析各种蛋白质特性和相对于标准或使用预先定义的消光系数来测量浓度变得容易。
在这篇博客文章中,Jordi实验室将专乐动体育登录注于使用紫外吸收光谱作为一种确定蛋白质特性的方法。
紫外吸收成像蛋白质特性
两种氨基酸主要负责蛋白质的紫外线吸收:色氨酸和酪氨酸。这些蛋白质在280nm波长处都有摩尔吸收系数,但蛋白质本身的吸收峰很大程度上取决于这些特定氨基酸在线性链中的浓度和排列方式。蛋白质的最小和最大紫外吸收随氨基酸组成的变化而变化。这提供了一种测量蛋白质混合物或未知样品中已知蛋白质纯度和氨基酸浓度的基本方法。
测定溶液中蛋白质含量最简单的方法是用分光计直接测定紫外吸收度。样品暴露在波长260 - 280m的紫外光下,并测量其吸收程度。这种技术是理想的快速和简单的测量纯蛋白质含有色氨酸和酪氨酸芳香链。
该技术随后不适用于分析不含色氨酸和酪氨酸的样品的蛋白质特性。通常,205nm的峰值波长被用于使用紫外-可见光谱学对这些顽固的样品进行光谱分析。
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