任何接触过蛋白质的生物化学家都知道纯度的重要性。它是进一步实验和一系列下游应用的最好的质量标志之一。尽管在过去，即使是在一个细胞内，不同蛋白质的浓度和种类也非常多，因此纯化工作流程非常复杂，但有效分离感兴趣的关键蛋白质在很大程度上已经成为一个常规过程。然而，这并不意味着杂质筛选不再是必要的。
这篇文章应该作为蛋白质分析基础的简要指南，包括它需要什么，我们通常如何进行它，以及为什么它仍然是分析和制备蛋白质分离的关乐动体育赞助企业键部分。
为什么要分析蛋白质纯度?
不纯的蛋白质样品在许多方面都是有害的，会导致实验不准确或影响产品性能。让我们看一个具体的例子。
宿主细胞蛋白（HCP）是必须严格控制的过程相关的双产品，以保证新型生物治疗方法的疗效。生物制药必须是没有杂质认证的，以满足监管临床标准。在这种情况下，除了感兴趣之外的细胞蛋白质组内的所有蛋白质被认为是HCP。验证消除残余的不期望的HCP，随后是生物制药工作流程的强制性步骤。因此，蛋白质纯度分析在制备分离中的重要性。
由于蛋白质纯度差而产生的其他常见问题包括聚集、降解、错误折叠、沉淀等。这些现象中的任何一种都可能使分析准备工作付出昂贵的代价，导致资源和时间的损失。
如何进行蛋白质纯度分析?
虽然有几种可靠的技术可以用来进行蛋白质纯度分析，但很少有直接量化感兴趣的关键蛋白质。蛋白质纯度更多的是通过样品中杂质的浓度来推断，或者通过不存在杂质来保证。
紫外-可见分光光度法(UV-Vis)与液相色谱法相结合，是一般定量总蛋白计数的可靠工具。这依赖于氨基酸、酪氨酸和色氨酸对260-280纳米波长的固有摩尔吸收。它们的吸光度峰值很大程度上取决于它们在氨基酸链中的位置和浓度。紫外线吸收随后提供了一个相当可靠的测量已知蛋白质纯度的方法。电泳是一般蛋白质纯度分析的另一种常用技术。
然而，某些应用，比如上面提到的生物制品，需要对蛋白质纯度进行更严格的注意。生物化学家纯化难以分离的蛋白质或在精细边缘操作时，通常使用靶向方法，如酶联免疫吸附测定法(elisa)或质谱液相色谱法(LC-MS)。这两种技术使用户能够同时评估和量化不同浓度的多种蛋白质。
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