蛋白浓度是影响治疗效果的重要参数。准确的定量为配方研究和酶动力学测定提供了关键信息。定量对于商业药品制备中广泛的下游应用是至关重要的。几种常用的测定蛋白质浓度的方法包括紫外吸收法、Bradford测定法和bicinchoninic酸测定法。其中,紫外吸收法因其准确度高、成本低、分析时间短而得到广泛应用。
对于紫外线吸收,蛋白质浓度是根据已知的蛋白质消光系数(比尔定律)在特征波长下测量的紫外线吸收度来确定的。这种蛋白质对紫外线的强吸收是由于氨基酸中存在芳香侧链,如酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸。吸光度测量通常在280 nm处进行,以减少蛋白质溶液中其他化合物的干扰。根据比尔定律,摩尔消光系数(M-1厘米-1)是溶解在给定溶液中的给定物质的常数,并在给定波长下测量。对于蛋白质,百分比溶液消光系数(g/100mL)-1厘米-1为方便而代替摩尔消光系数。蛋白质的溶液消光系数百分比是一个关键参数,可以通过与商业标准校准确定,根据蛋白质的化学性质估计,或者可以从NIST提供的数据库中获得。
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